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特異性神經(jīng)元抗核抗體（Hu抗體）的檢測
閱讀：635 發(fā)布時間：2011-6-30某些神經(jīng)系統(tǒng)綜合征是由于惡性腫瘤的遠(yuǎn)隔影響所造成，稱為神經(jīng)系統(tǒng)副腫瘤綜合征（paraneoplasticsyndromesofthenervoussystem，PNSNS）。近年來由于發(fā)現(xiàn)了特異性的神經(jīng)元抗核抗體（Hu抗體），因而認(rèn)為此病與自身免疫有關(guān)。Hu抗體實質(zhì)上為多克隆IsC，能固定補(bǔ)體，可與中樞神經(jīng)系統(tǒng)及周圍神經(jīng)系統(tǒng)中所有神經(jīng)元胞核及小細(xì)胞肺癌細(xì)胞核起反應(yīng)，但不與其他組織細(xì)胞（如腦膠質(zhì)細(xì)胞，肝、腎等組織細(xì)胞）發(fā)生反應(yīng)，并與SLE等結(jié)締組織疾病所產(chǎn)生的非特異性抗核抗體有本質(zhì)上的差別，因此，稱為特異性神經(jīng)元抗核抗體（Hu抗體）。采用免疫熒光、ELISA法即可測出患者血清中Hu抗體。陳齊鳴等（1996）報道采用先進(jìn)的親合免疫細(xì)胞組織化學(xué)ABC法和免疫印跡技術(shù)檢測PNSNS患者的Hu抗體，其敏感性和特異性顯著增高?，F(xiàn)介紹親合免疫細(xì)胞組織化學(xué)ABC法檢測Hu抗體。
1．操作步驟
（1）6／1m正常人大腦額葉、顳葉、肝臟、腎臟及Wistar大鼠的大腦、小腦的冰凍切片干燥10min。
（2）丙酮固定10min后用含0．3％H202、1％BSA的PBS處理10min，抑制內(nèi)源性過氧化物酶。
（3）加10％羊血清／PBS封閉30min后，分別加稀釋的血清、腦脊液或尿液標(biāo)本在4℃冰箱過夜。
（4）PBS洗5min，更換3次，以下同。加適度稀釋的生物素標(biāo)記羊抗人IeC（第二抗體），37℃孵育15min。
（5）同上洗滌，加ABC復(fù)合物室溫作用15min。
（6）同上洗滌，DAB-H202底物顯色后，常規(guī)封片鏡檢。
2．結(jié)果顯示
（1）PNSNS患者的血清、腦脊液及尿液中的Hu抗體與正常人和Wistar大鼠所有神經(jīng)組織中的神經(jīng)元胞核形成均勻染色，核仁陰性，但不與神經(jīng)組織中的膠質(zhì)細(xì)胞、肝臟及腎臟組織細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，說明該法具有高度特異性。
（2）血清及腦脊液中Hu抗體的滴度zui高可達(dá)1：64 000及1：4 000，尿液中Hu抗體滴度達(dá)到1：200，說明該法敏感性很高。
（3）以免疫印跡技術(shù)測得17例患者血清中的抗體識別神經(jīng)元胞核中蛋白抗原分子量為350-400kD。
3．臨床意義 通常認(rèn)為，IgC不能從腎小球濾過，尿中測出IgC型Hu抗體，可能是Hu抗體損害了腎小球，使其通透性增加所致。腦脊液Hu抗體滴度與血清中的抗體滴度無關(guān)聯(lián)，提示可能有CNS中的局部合成。有76％（13／17）患者以PNSNS起病，并檢出Hu抗體，爾后發(fā)現(xiàn)原發(fā)灶，說明Hu抗體的測定對于部分癌腫，特別是小細(xì)胞肺癌的早期診斷有實際臨床意義。
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