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免疫印跡技術(shù)和免疫斑點技術(shù)

閱讀:944          發(fā)布時間:2011-6-15

免疫印跡技術(shù)和免疫斑點技術(shù)

點擊次數(shù):264 發(fā)布時間:2009-9-30

免疫印跡技術(shù)又稱Western印跡法,它將凝膠電泳與固相免疫結(jié)合,首先通過蛋白質(zhì)電泳技術(shù)將需要區(qū)分的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固相載體如NC膜等上,再借助酶免疫、放射免疫等技術(shù)進行測定。該法能分離分子大小不同的蛋白質(zhì)并確定其分子質(zhì)量,常用于檢測多種病毒抗體或抗原。

免疫斑點試驗(dotimmunobindingassay,DIBA)是利用硝酸纖維素膜(NC膜)或乙酸纖維素膜作為固相支持物,進行抗原—抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測方法。該法具有微量、快速、經(jīng)濟、方便等特點,可用于檢測抗體或抗原。

免疫斑點技術(shù)的原理是硝酸纖維素膜和醋酸纖維素膜具有很強的靜電吸附力,在中性條件下即可有效地吸附蛋白質(zhì)等生物大分子,因而將抗原吸附于纖維素膜后,就可利用纖維素膜作為固相載體進行抗原—抗體反應(yīng)。當加入抗體后(即可與膜上的抗原結(jié)合,然后再加入帶有標記物的抗體,使標記通過抗抗體和相應(yīng)抗體的結(jié)合間接地交聯(lián)于纖維素膜上。加入標記物相應(yīng)的底物后,標記物即可與底物作用形成不溶性產(chǎn)物,呈現(xiàn)斑點狀著色,從而判定結(jié)果。

根據(jù)所用的標記物不同,可分為辣根過氧化物酶免疫斑點試驗(使用辣根過氧化物酶作為抗抗體的標記物)、堿性磷酸酶免疫斑點試驗(使用堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶復(fù)合物作為酶標記物)和金銀染色免疫斑點試驗(使用膠體金作為抗抗體的標記物)等。其中,zui常用的是以辣根過氧化物酶標記系統(tǒng)為基礎(chǔ)的免疫斑點試驗。

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