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抗精子抗體（antispermatozoa antibody，ASA）檢測(cè)
閱讀：638 發(fā)布時(shí)間：2010-12-18男性體內(nèi)的血睪屏障可使精子與免疫系統(tǒng)隔離。但當(dāng)此種屏障因疾病或創(chuàng)傷而受損時(shí)，精子或其可溶性抗原逸出，可導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生自身抗精子抗體（antispermatozoa antibody，ASA），從而抑制精子產(chǎn)生，造成男性不育。女性生殖道具有酶系統(tǒng)，能降解進(jìn)入的精子抗原，使其不能達(dá)免疫系統(tǒng)。此種酶系統(tǒng)的缺陷可使精子抗原保持完整而刺激同種抗精于抗體產(chǎn)生。大約10％～30％原因不明的女性不孕癥可能由于ASA所致。
測(cè)定ASA的方法很多，目前常用的有熒光抗體法，淺盤(pán)微量凝集法，伊紅Y染色法，試管或玻片凝集法，固相酶染色法，免疫珠法，免疫洗選法（panning法）及ELISA法等。這些方法各有利弊，都不能*臨床快速診斷的要求。莊南等（1991）在ELISA反應(yīng)系統(tǒng)中，加入適量的PEG，可使每步反應(yīng)時(shí)間在10min內(nèi)完成，同時(shí)用DW-T快速?zèng)_洗代替常規(guī)的PBS-T洗滌方法，從而能在40rain內(nèi)完成檢驗(yàn)。且該法有較高特異性和精密度，適用于常規(guī)工作。現(xiàn)介紹快速ELISA法檢測(cè)抗精子抗體。
1．試劑 ①人精子膜抗原：取20份正常生育男性的精液，液化后，用PBS洗5次，沉淀的精子混懸于含0．5％NP-40（FLUKA）的Tris-HCl緩沖液中，4℃1h，17 000Xg離心30min，取上清液測(cè)定蛋白量，即為精子膜抗原；②HRP標(biāo)記的羊抗人丁球蛋白；③4％和8％PEG-PBST緩沖液：0．01mol／L，pH7．4PB加入NaCl達(dá)0．85％，Tween-20為0．05％及PEG6000為4％或8％。
2．操作步驟 將精子膜抗原用包被液按1：100稀釋?zhuān)环磻?yīng)板微孔，每孔100uL，4℃過(guò)夜，用含0．05％Tween-20的蒸餾水（DW-T）洗3次，每孔加待測(cè)血清50uL，同時(shí)設(shè)性、陽(yáng)性和空白對(duì)照孔，43℃10rain，DW-T洗3次后，加zui適工作濃度的HBP標(biāo)記的抗人γ球蛋白（用含0％小牛血清的4％PEG-PBST作1：1 000稀釋?zhuān)?，每?00uL，43℃10min；DW—T洗3次，加底物（OPD-H202）溶液，每孔100yL，37％10min使呈色，用2mol／LH2S04 50gL終止反應(yīng)，測(cè)492nm波長(zhǎng)吸光度值（A），以P／N≥2．1為陽(yáng)性。
3．臨床意義 ASA的檢出率因采用的檢測(cè)方法不同，結(jié)果也不一致。通常不育者血清中ASA檢出率在10％—30％左右。尤其是梗阻性無(wú)精癥病人，ASA陽(yáng)性率可高達(dá)60％。ASA的出現(xiàn)以及滴度升高是造成免疫性不育、不孕的根本原因，因而ASA的檢測(cè)對(duì)不育的臨床治療和預(yù)后的判斷提供了有價(jià)值的指標(biāo)。