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競(jìng)爭(zhēng)分析作圖法實(shí)驗(yàn)原理
閱讀：852 發(fā)布時(shí)間：2010-11-24確定2種單克隆抗體是否結(jié)合蛋白質(zhì)抗原上同一位點(diǎn)的zui簡(jiǎn)便的方法是競(jìng)爭(zhēng)分析法。該方法可確定一種抗體是否對(duì)另一種抗體與某一位點(diǎn)的結(jié)合具有抑制作用。如果兩者相互競(jìng)爭(zhēng)，說(shuō)明2種抗體識(shí)別相同位點(diǎn)或同一蛋白質(zhì)的空間折疊結(jié)構(gòu)域。相反，如果2種抗體與抗原結(jié)合無(wú)相互競(jìng)爭(zhēng)抑制作用，能夠同時(shí)與抗原結(jié)合，說(shuō)明2種抗體具有不同的特異性，所識(shí)別的抗原表位也不同）。
競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)
競(jìng)爭(zhēng)分析法對(duì)單克隆抗體的特異性分析zui為有用，而多克隆抗血清可識(shí)別多種不同的位點(diǎn)，故不宜用此法分析。檢測(cè)抗原與抗體間相互競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)的方法較多，但其中至少必須應(yīng)有一種抗體被直接標(biāo)記，同時(shí)對(duì)抗體所結(jié)合的抗原經(jīng)過(guò)純化。其中ElISA方法zui常用，檢測(cè)用的抗體可用生物素化標(biāo)記（Wagener等1984）。在Wagener的試驗(yàn)中，主要是為了檢測(cè)2個(gè)新的單克隆抗體XHl和XH2，與已知的抗YFPl抗體ZO-1競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合目的抗原YFPl。首先，將抗原蛋白質(zhì)YFPl包被96孔酶標(biāo)板，直接測(cè)定以確定所有抗體是否具有活性，并均能與包被抗原進(jìn)行反應(yīng)。還必須事先測(cè)定抗體的滴度，以確定競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)的zui敏感條件。隨后還應(yīng)檢測(cè)未標(biāo)記的抗體XHl、XH2和ZO-1分別與生物素標(biāo)記的ZO-1競(jìng)爭(zhēng)性與抗原YFPl結(jié)合的能力。