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轉(zhuǎn)錄因子的設(shè)計逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄核糖核酸（mRNA，總RNA，病毒RNA，并在體外轉(zhuǎn)錄的RNA），從各種來源，使用常規(guī)的熱循環(huán)儀和實時PCR的工具（例如，在LightCycler ^®儀器）以下應(yīng)用程序：

• 實現(xiàn)高靈敏度兩步RT-PCR
  轉(zhuǎn)錄因子逆轉(zhuǎn)錄采用的是傳統(tǒng)的熱循環(huán)儀和實時PCR儀器（例如，在LightCycler ^®儀器）。
• 獲得更多的全長轉(zhuǎn)錄-高達14 KB的
  cDNA文庫，可以產(chǎn)生大量插入。
• 反轉(zhuǎn)錄困難模板的
  酶以及在升高的溫度下工作，從而克服了RNA二級結(jié)構(gòu)（例如，富含GC的RNA模板）和促進佳的反應(yīng)條件。
• 高效地標(biāo)簽的cDNA 
  的Cy3，Cy5標(biāo)記，地高辛，生物素，或氨基烯丙基-標(biāo)記的核苷酸引入cDNA的合成過程中。

卷活動：
20 U /μL。

轉(zhuǎn)錄因子的逆轉(zhuǎn)錄酶，大腸桿菌表達的重組逆轉(zhuǎn)錄 大腸桿菌。酶RNA指導(dǎo)的DNA聚合酶活性，DNA依賴性DNA聚合酶活性，RNase H活性，和退繞活動。被接受為模板，在引物的存在下，無論是單鏈DNA和RNA分子。

1. 存儲緩沖器中的逆轉(zhuǎn)錄酶，轉(zhuǎn)錄因子的
2. 轉(zhuǎn)錄因子的RT緩沖液，5倍濃。 

圖1：小鼠β-肌動蛋白基因的兩步法RT-PCR在傳統(tǒng)的熱循環(huán)儀檢測。
不同數(shù)量的小鼠肝臟總RNA反轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)錄因子逆轉(zhuǎn)錄酶的使用oligo（dT）₁₅吸20μl反應(yīng)。5微升模板當(dāng)時 ??擔(dān)任。一式兩份進行所有的反應(yīng)在一個步驟2-kb的肌營養(yǎng)不良蛋白RNA片段的RT-PCR （比較其他反向轉(zhuǎn)錄酶的轉(zhuǎn)錄因子）的圖2：靈敏度，與展開高保真酶的PCR成分用作共混轉(zhuǎn)錄因子的反向。轉(zhuǎn)錄酶具有高的靈敏度。圖3：克服困難的RNA模板，通過轉(zhuǎn)錄因子逆轉(zhuǎn)錄酶在高達65℃。轉(zhuǎn)錄因子的逆轉(zhuǎn)錄酶或其他逆轉(zhuǎn)錄酶一起使用的特定引物反轉(zhuǎn)錄為4.9-kb的片段（GC含量：70％）人28S核糖體RNA，在55℃下，60℃下，和65℃。在兩步驟RT-PCR方法，快速啟動Taq DNA聚合酶和其相關(guān)聯(lián)的GC-RICH分辨率解決方案被用于在一個常規(guī)的熱循環(huán)儀中擴增的389-bp的片段。由于其高的熱穩(wěn)定性，可以使用轉(zhuǎn)錄因子的逆轉(zhuǎn)錄酶可以在高達65℃，使得它在快速啟動Taq DNA聚合酶結(jié)合，給出的產(chǎn)品富含GC的模板時，必須是反轉(zhuǎn)錄，并在隨后的PCR擴增。泳道1：轉(zhuǎn)錄因子逆轉(zhuǎn)錄酶巷2：核糖核酸酶從A供應(yīng)商HM-木履巷3：禽流感RNA酶H-酶從供應(yīng)商A 圖4：全長轉(zhuǎn)錄高達14 KB的敏感，高產(chǎn)與轉(zhuǎn)錄因子的RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄酶。有關(guān)詳細信息，參見圖5。圖5：全長轉(zhuǎn)錄高達14 KB的敏感，高產(chǎn)與轉(zhuǎn)錄因子逆轉(zhuǎn)錄酶RT-PCR。不同數(shù)量的人骨骼肌總RNA反轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)錄因子逆轉(zhuǎn)錄酶和其他反向通過寡聚（dT）引發(fā)中的20-μl反應(yīng)，產(chǎn)生一個14-kb的mRNA為人類肌營養(yǎng)不良蛋白基因，其中一個長的真核mRNA的轉(zhuǎn)錄酶PCR（圖4）中，在隨后的2微升RT反應(yīng)使用擴增的1.9-kb片段，使用快速啟動Taq DNA聚合酶。PCR引物中位于附近的mRNA的5'末端，以便可以生成只有當(dāng)*轉(zhuǎn)錄全長的14-kb的mRNA的PCR產(chǎn)物（圖5）。