抗線粒體抗體AMA的檢測(cè)方法

    抗線粒體抗體（anti-mitochondrialantibody，AMA）是一種非器官特異性、非種屬特異性的自身抗體。線粒體存在于全身各組織的細(xì)胞中，但以遠(yuǎn)曲腎小管zui為豐富，故檢查AMA所用的抗原基質(zhì)多選用腎髓質(zhì)。AMA檢測(cè)目前仍主要用IFA，但近來(lái)也有采用RIA、ELISA和斑點(diǎn)免疫法等方法。下面以間接免疫熒光法為例檢測(cè)AMA。

    1．腎組織冰凍切片  將大鼠處死，剖腹取腎，在腎中部成楔形切下腎組織，立即冰凍。用冷凍切片機(jī)切成4—6um，貼于清潔玻片上，迅速用電風(fēng)扇吹干，不固定。密封后置—20℃冰箱中保存。

    2．操作步驟

    （1）將待測(cè)血清用0．01mol／L，pH7．4PBSl：10稀釋后滴加于底物片上，室溫、濕盒反應(yīng)30min。用PBS沖洗后再浸洗3次，分別為5min、5min、10rain（以下同），吹干。每批試驗(yàn)設(shè)陽(yáng)性、陰性對(duì)照。

    （2）滴加zui適濃度熒光抗體，室溫、濕盒反應(yīng)30min。同上法充分洗滌，吹干。

    （3）用無(wú)自發(fā)熒光的緩沖甘油封片，熒光顯微鏡檢查。AMA的特異熒光出現(xiàn)于富含線粒體的遠(yuǎn)曲腎小管上皮細(xì)胞的胞漿中。

    3．注意事項(xiàng)  ①線粒體的穩(wěn)定性差，極易自然破壞。因此，在制作切片時(shí)應(yīng)注意將組織標(biāo)本速凍，不能反復(fù)凍融，切片后要快速吹干，以防線粒體破壞；②切片保存是關(guān)鍵，放—20~C冰箱一定要防潮，從冰箱取出（特別是夏天）要注意防止水汽凝結(jié)，造成切片潮濕而破壞線粒體。取出切片后應(yīng)立即放電風(fēng)扇下吹干10min。

    4．臨床意義  原發(fā)性膽汁性肝硬化患者AMA陽(yáng)性率可達(dá)90％以上，且抗體滴度甚高，半數(shù)以上病人可達(dá)1：200—1：6 000。膽總管阻塞性肝硬化、繼發(fā)性膽汁性肝硬化患者，抗線粒體抗體皆為陰性。阻塞性肝硬化患者陽(yáng)性率在3％以下，而慢性活動(dòng)性肝炎陽(yáng)性率為90％。正常人陽(yáng)性率低于1％。據(jù)此，抗線粒體抗體的檢查可作為原發(fā)性膽汁性肝硬化和肝外膽道阻塞性肝硬化癥的鑒別診斷。另外，由于在慢性活動(dòng)性肝炎時(shí)此抗體陽(yáng)性率亦較高，故對(duì)鑒別診斷肝炎也有參考價(jià)值。

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