抗卵巢抗體（antiovarianantibody，AoAb）檢測(cè)

    抗卵巢抗體（antiovarianantibody，AoAb）zui早發(fā)現(xiàn)于卵巢早衰、過(guò)早閉經(jīng)患者，已證實(shí)該病與自身免疫性病理反應(yīng)關(guān)系密切，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)AoAb的存在可以影響卵巢功能，且有顯著的抗生育效應(yīng)，因此更引人注目。AoAb檢測(cè)的方法有iFT、RIA及ELISA法，但皆失之繁雜，或要求一定的設(shè)備條件，未能廣泛應(yīng)用。陳金娣等（1995）建立的檢測(cè)AoAb免疫斑點(diǎn)法（1DA），具有較好的敏感性、特異性及可重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn)；且簡(jiǎn)便易行，觀察結(jié)果直觀，便于基層應(yīng)用?，F(xiàn)介紹免疫斑點(diǎn)法檢測(cè)AoAb。

    1．試劑  純化人卵巢抗原（ovarian antigens，O-Ag）：將人卵巢組織洗凈剪碎，浸于0.04mol／L，pH7，4Tris-HCl緩沖液中勻漿，過(guò)濾，將濾液5000r／min離心15min，沉淀懸浮于0.01％蔗糖溶液中，加入TritonX-100至1％濃度，攪拌2h，13 000r／min離心1h。上清液流穿抗人全血清-Sepharose4B柱。考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白含量為1．2mg／mL，與抗人全血清，抗人纖維蛋白原抗體作雙向免疫擴(kuò)散，未見(jiàn)沉淀線，即為純化O-Ag，用作包被抗原。

    2．操作步驟  將NC膜劃成nnX 5mm的小方格，浸于0．01mol／L，pH7．4 PBS中30rain，濾紙吸干；取2gLO-Ag（4／lg／mL）點(diǎn)樣于NC膜方格正中，室溫自然干燥；用含1％BSA的pH7．4，0．01mol／LPBS封閉，37％60rain，洗滌NC膜3次，每次3min（以下同），用濾紙吸干；加待測(cè)血清2rtl于包被O-Ag處，37~C 30min，洗滌后吸干；置HRP-SPA（zui適工作濃度）溶液中，37~C 30min；洗滌后浸入底物（DAB-H2O2）溶液中，37~C避光反應(yīng)5min；流水沖洗終止反應(yīng)。加樣處出現(xiàn)棕色斑點(diǎn)者為陽(yáng)性，無(wú)色或與背景均呈淡黃色者為陰性。

    3．臨床意義  陽(yáng)性見(jiàn)于卵巢早衰，在不孕和流產(chǎn)患者中，AoAb陽(yáng)性率（42．4％—52．2％）顯著高于健康孕婦的陽(yáng)性率（3．2％），表明AoAb的存在與不孕和流產(chǎn)的發(fā)生之間有著密切關(guān)系。由于卵巢損傷、感染、炎癥等原因造成卵巢抗原的外溢，在免疫功能存在某種紊亂的個(gè)體，誘導(dǎo)產(chǎn)生AoAb。AoAb會(huì)進(jìn)一步加重卵巢的損傷，并導(dǎo)致子宮、胎盤(pán)的功能不健全，引起不孕和流產(chǎn)。

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