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紫外-可見分光光度計的應用-用雙波長法測定混濁樣品 由于一些材料成分復雜和樣品混濁，給分光光度法帶來了困難。為此，或是改變材料本身，如從制樣考慮，降低懸浮液的混濁度；或從改進儀器著手，如用積分球的辦法收集散射光；或用乳白玻璃法減輕散射的影響，但都不能從根本上解決問題。1951年B.Chance及其同事為了研究細胞色素，對儀器和測定技術(shù)作了進一步的改進，摸索了雙波長法，試制了*臺雙波長分光光度計。以后，1995年Bulter和Bruit教授用此法來測定水果成熟的程度。雙波長法解決了由于樣品混濁而引起的測定誤差。同時，這種新的設(shè)計還帶來了許多優(yōu)點。 由于樣品混濁產(chǎn)生的散射和非特征吸收信號常常干擾欲測的特征吸收信號，致使測定失敗。尤其在進行動力學測量中發(fā)生變化，如中間產(chǎn)物（它們可能就是欲測的組分）存在的時間短，且散射的情況可能在測定過程中發(fā)生變化，這就更增加了測量的困難。為了除去這些非特征信號，從理論上說可以有三種辦法：電學法、雙光束法和雙波長法。前二者都有不可克服的困難。雙波長法是不用參考溶液，是兩個不同波長的單色光交替通過代測的混濁樣品，然后對通過此樣品的兩個波長的吸收信號進行測量并加以比較。 如把一個波長λe選在欲測組分吸收帶的峰值上，另一波長λR選在欲測組分吸收帶的凹谷上，那末這兩個波長的光束通過樣品后所引起的吸收信號差就應該僅僅是欲測的特征信號了。B.Chance根據(jù)這一設(shè)想設(shè)計了世界上*臺雙波長分光光度計。隨著科學技術(shù)的不斷發(fā)展，雙波分光光度計已越來越完善了。