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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第18年

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人脂蛋白(Lpa)定量檢測(cè)試劑盒 ELISA 試劑盒

時(shí)間:2015-2-9閱讀:712
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本試劑盒采用雙抗體一步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本和酶標(biāo)工作液加入到預(yù)先包被人脂蛋白(Lpa)抗體的透明酶標(biāo)包被板中,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入顯色劑A、B液,顯色劑(TMB)在辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下變成,顏色的深淺與樣品中人脂蛋白(Lpa)濃度呈正相關(guān),450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,計(jì)算樣本中人脂蛋白(Lpa)含量。

1、準(zhǔn)備:從人脂蛋白(Lpa)定量檢測(cè)試劑盒 ELISA 試劑盒冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔,記錄各孔位置,在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL;待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);每孔再加入酶標(biāo)工作液100μL;空白對(duì)照孔不加。

4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板)。

6、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,37℃避光顯色15min。

7、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn))。

8、測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值(OD值)。

9、計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

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