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免疫組化染色具體操作步驟

時間:2018/6/29閱讀:1713
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免疫組化染色具體操作步驟介紹
(以美國ZYMED公司SP試劑盒為例)
1、石蠟切片脫蠟至水。
2、3%H2O2室溫孵育5~10分鐘,以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。
3、蒸餾水沖洗,PBS浸泡5分鐘,(如需采用抗原修復(fù),可在此步后進(jìn)行)。
4、 5~10%正常山羊血清(PBS稀釋)封閉,室溫孵育10分鐘。傾去血清,勿洗,滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗或一抗工作液,37℃孵育1~2小時或4℃。
5、PBS沖洗,5分鐘×3次。
6、滴加適當(dāng)比例稀釋的生物素標(biāo)記二抗(1%BSA-PBS稀釋),37℃孵育10~30分鐘;或滴加第二代生物素標(biāo)記二抗工作液,37℃或室溫孵育10~30分鐘。
7、PBS沖洗,5分鐘×3次。
8、滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素(PBS稀釋),37℃孵育10~30分鐘;或第二代辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液,37℃或室溫孵育10~30分鐘。
9、PBS沖洗,5分鐘×3次。
10、顯色劑顯色(DAB或AEC)。
11、自來水充分沖洗,復(fù)染,封片。
12、冰凍切片免疫組化染色步驟
13、冰凍切片4~8mm,室溫放置30分鐘后,入4℃丙酮固定10分鐘,PBS洗,5分鐘×3.用3%過氧化氫孵育5~10分鐘,消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS洗,5分鐘×2。

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