1 儀器與試劑

1200液相色譜儀系列，由 G1312A液相泵、G1316A柱溫箱、G1315B二極管陣列檢測(cè)器、7725手動(dòng)進(jìn)樣閥和25  微量進(jìn)樣器組成；HJ．2磁力加熱攪拌器；PHS 3C型酸度計(jì)。利多卡因、布比卡因均為鹽酸鹽注射液，丁卡因?yàn)辂}酸鹽粉末。乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水。含鹽酸利多卡因、鹽酸布比卡因和鹽酸丁卡因的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液及由其稀釋而成的標(biāo)準(zhǔn)溶液均置于4cc冰箱中保存。

健康人血漿從湖南中心血站購(gòu)得（冰箱中一4O℃冷凍保存不超過(guò) 3星期），含利多卡因、布比卡因和丁卡因的加樣血漿于4℃冰箱中保存，保存時(shí)間不超過(guò) 24 h。病人血樣來(lái)自長(zhǎng)沙市第四醫(yī)院，病人首先被一次性注入布比卡因 10．9 mg（腰麻），然后在 0．5 h內(nèi)分 4次注入利多卡因，累計(jì)量為282．9 mg （硬膜外麻醉），從實(shí)施麻醉開(kāi)始計(jì)時(shí)，2 h進(jìn)行*次采樣，7 h進(jìn)行第二次采樣。 局部麻醉劑的標(biāo)準(zhǔn)溶液 、加樣血漿溶液及病人血漿溶液，以0．1 mol／L NaOH溶液調(diào)節(jié) pH值至 1 1，作為本實(shí)驗(yàn)的料液。

2．1 色譜條件

色譜柱：Spherigel C 柱（5 Ixm，150 mm×4．6 mm i．d．）（大連江申分離科學(xué)技術(shù)公司），流速為

1．0          mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，進(jìn)樣量為 1 IxL；流動(dòng)相：750 mL 0．025 mol／L三乙胺水溶液，以磷酸調(diào)pH 3．0，用 0．45 Ixm濾膜過(guò)濾，與 250 mL乙腈混勻，脫氣 10 min備用。

2．2 實(shí)驗(yàn)方法

液．液．液微萃取體系含料液相、有機(jī)相和接受相 3個(gè)液相（如圖1）。在萃取瓶中加入一個(gè)微型攪拌磁子和 1 mL、pH為 l1．0的料液，緩慢加入200 IxL苯，再用25  微量進(jìn)樣器抽取 ILL0．2 mol／L的鹽酸溶液，微量進(jìn)樣器固定在鐵夾上，其針尖浸入到有機(jī)溶劑中，

小心按下微量進(jìn)樣器的活塞，使反萃相在有機(jī)相中形成一個(gè)小液滴懸掛在針尖上。開(kāi)啟攪拌器，攪拌速度為 250 r／min，萃取 45 min后，將反萃相小心抽回進(jìn)樣器，直接進(jìn)樣到液相色譜體系中進(jìn)行分析。以萃取結(jié)束后分析物在接受相中的濃度和萃取開(kāi)始前分析物在料液相的初始濃度之比計(jì)算富集因子。

3．1實(shí)際血樣的檢測(cè)

標(biāo)準(zhǔn)混合溶液的色譜圖和加樣血漿經(jīng)過(guò)液一液一液微萃取后的色譜圖分別見(jiàn)圖4（A）和圖4（B）。由圖4（A）和圖4（B）可知，局麻藥通過(guò) LLLME后得到了很大程度的富集。以此為依據(jù)，本實(shí)驗(yàn)在優(yōu)化條件下，對(duì)實(shí)際病人的血樣進(jìn)行了測(cè)定，圖4（c）和圖4（D）分別是實(shí)施利多卡因、布比卡因麻醉7 h時(shí)的病人血漿直接進(jìn)樣的色譜圖和其 LLLME色譜圖。由圖4（c）可知，由于病人血樣復(fù)雜，且局麻藥的濃度較低，無(wú)法直接進(jìn)行測(cè)定。比較圖4（D）和圖4（c）可知，LLLME可以消除血漿本身對(duì)局麻藥檢測(cè)的干擾，且局麻藥的濃度經(jīng)微萃取后得到了明顯富集。測(cè)得2 h后所采血樣中的利多卡因濃度為1．06 mg／L，布比卡因濃度為0．22 mg／L；7 h后所采血樣中的利多卡因濃度為0．28 mg／L，布比卡因濃度為0．06 mg／L。

說(shuō)明該 LLLME—HPLC方法消除干擾能力強(qiáng)，靈敏度高，可以用于實(shí)際血漿樣品中局麻藥的測(cè)定。