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如何選擇適用的液相色譜柱

閱讀:928      發(fā)布時間:2024-12-13
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液相色譜柱是一種高純度、大比表面積、高機械強度、較高的碳鏈覆蓋率的新一代球形硅膠填料。金屬不純物含量極低,減少了有些螯合物在硅膠基質(zhì)柱上的絡(luò)合作用。固定相極性弱于流動相時的液相色譜法被稱為反相色譜法,固定相極性強于流動相時的液相色譜法被稱為正相色譜法。固定相被涂覆在載體表面,極易流失,為此科學(xué)家對流動相使用給出了合理的建議:流動相極性與固定液極性應(yīng)具有較大差別,以減少固定液流失。
在選擇色譜柱之前,先多了解自己的樣品和雜質(zhì),他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等:
1.如果樣品極性太強,或酸性太強;可以選擇CN,NH2或硅膠柱,HILIC(親水色譜),也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱(缺點是離子對試劑平衡時間長,對流動相pH要求比較精密,否則很難重復(fù)實驗,另外離子對試劑很難洗下來,基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實驗)。
2.若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質(zhì),且硅膠端基封尾)或一些經(jīng)過修飾的C18柱(如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等),他們都會減少堿性化合物的拖尾,一般會選擇中性或偏堿的條件下做,因為這樣可增加堿性樣品的保留。
 

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