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凝膠成像系統(tǒng)中的光源因素

閱讀:3119        發(fā)布時(shí)間:2017-4-14
凝膠成像系統(tǒng)概念:
 
    它是以一套可對(duì)凝膠進(jìn)行成像的光學(xué)系統(tǒng),而光源便是其光路系統(tǒng)的重要組成部分,可以說(shuō)沒(méi)了光源,成像系統(tǒng)幾乎無(wú)法運(yùn)行使用,但與CCD、鏡頭以及分析軟件相比,往往卻沒(méi)有得到應(yīng)有的重視。我們經(jīng)常遇到這樣的用戶,他們知道系統(tǒng)光源出現(xiàn)故障或整個(gè)系統(tǒng)報(bào)廢的時(shí)候都不知道凝膠成像透射紫外中有305nm與365nm兩種紫外燈管,或者搞不清他們之間有何區(qū)別。這其中固然有銷(xiāo)售商售后的不到位,但也反映出我們對(duì)凝膠成像系統(tǒng)光源的不重視和缺乏足夠的了解,希望這篇文章能夠幫您理清他們的區(qū)別和各自的作用。
 
凝膠成像系統(tǒng)類(lèi)別:
 
    根據(jù)應(yīng)用的不同,往往不同型號(hào)凝膠成像產(chǎn)品配有差異性的光源,大致類(lèi)型可分為白光光源、紫外光源和高強(qiáng)度三色LED燈,其中白光和紫外光源又分別有透射和反射之分。
1、 不銹鋼材質(zhì)DE-500暗箱機(jī)身;
2、 CCD所在位置;
3、 鏡頭所在位置;
4、 機(jī)身光源控制面板,可控制濾光輪位置和激發(fā)光源開(kāi)關(guān);
5、 雙側(cè)反射白光光源;
6、 雙側(cè)雙波長(zhǎng)(254nm、365nm)反射紫外光源;
7、 高度可調(diào)的抽拉式托盤(pán),供化學(xué)發(fā)光使用;
8、 透射白光板,可折疊;
9、 雙波長(zhǎng)(302nm、365nm)紫外透射光源。
 
    在Fluorchem Q多色熒光成行系統(tǒng)中,雙側(cè)還安裝了三色LED燈光源。
    首先是雙側(cè)反射白光光源,也是我們使用zui多的光源,通常作為系統(tǒng)照明光源使用,即放置或調(diào)整DNA膠或蛋白膠位置,或在對(duì)鏡頭調(diào)整聚焦時(shí)使用,當(dāng)然在對(duì)非透明材質(zhì)的蛋白膠或其他成像物質(zhì)進(jìn)行成像時(shí)也需開(kāi)啟反射白光。
    其次透射白光,即通常所說(shuō)白光板,主要用于蛋白質(zhì)膠拍攝時(shí)使用,因?yàn)榘坠獍逦挥谕干渥贤鉄粝渖戏?,所以為不影響透射紫外光源的使用,同時(shí)也更節(jié)約室內(nèi)空間,白光板一般可以折疊豎立在箱體后部。
    透射紫外光源,即紫外透射燈箱,主要用于DNA膠拍攝,由于DNA常用的熒光染料是EB(即Ethidium bromide,溴化乙錠),而用標(biāo)準(zhǔn)302nm 紫外光透射儀激發(fā)并放射出橙紅色信號(hào),可用帶CCD成像頭的凝膠成像系統(tǒng)拍攝到,所以透射紫外的波長(zhǎng)通常是305nm段。
    紫外反射燈源,一般為選配件,主要原因是其使用并不廣泛,只是在非透明材質(zhì)的DNA跑膠載體如紙層析等的成像才需要使用。往往比較常用的還是透明的瓊脂糖凝膠與聚丙烯酰胺凝膠,透射光源*可以滿足,所以大部分廠家都只將紫外反射光源作為選配,只是在儀器上預(yù)留了位置與接口。還要指出的是抽拉式托盤(pán)的使用,由于化學(xué)發(fā)光成像無(wú)需任何光源,屬自發(fā)光成像,但由于化學(xué)發(fā)光的信號(hào)比較微弱,不穩(wěn)定,同時(shí)化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)的鏡頭往往是手動(dòng)聚焦,所以需要一個(gè)高度可調(diào)的托盤(pán)專(zhuān)門(mén)供化學(xué)發(fā)光成像使用。此外,上文提到的三色LED燈光源是3個(gè)高光強(qiáng)反射激發(fā)器(475納米,、534納米、632納米),為多色熒光成像系統(tǒng)的比不可少的組成部分。Fluorchem HD2 的DE-500暗箱還預(yù)留連續(xù)波長(zhǎng)光源光纖接口,以便于將來(lái)擴(kuò)展至連續(xù)波長(zhǎng)光源(激發(fā)光的波長(zhǎng)范圍400-750nm),涵蓋了一些需要特殊激發(fā)光的熒光,多應(yīng)用于多色熒光(Cy3/Cy5)和活體成像。

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