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內(nèi)毒素與鱟試劑的反應(yīng)原理

時間:2022/8/4閱讀:1248
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系海產(chǎn)動物,生物學(xué)分類上屬節(jié)肢動物門肢口綱劍尾目。在其血液中含有一種特殊的變形細(xì)胞amoebocyte。這種變形細(xì)胞中含有能被內(nèi)毒素激活的C因子、B因子、前凝固蛋白,因此內(nèi)毒素檢測LT鱟變形細(xì)胞溶解物試驗的機(jī)理即是內(nèi)毒素通過激活C因子、B因子、前凝固酶,而使可凝固蛋白變成凝固蛋白肉眼可見的凝膠),從而可以半定量及定量地知內(nèi)毒素的含量(圖1。



日本學(xué)者在對可凝固蛋白氨基酸順序研究的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)內(nèi)毒素激活的凝固酶的作用點為可凝固蛋白的第18Arg19Ghr間的肽健,以及第46Arg47 G1y間的肽鍵而裂解為A鏈、B鏈及C肽。且在切斷部位的羧基端氨基酸的結(jié)構(gòu)均為-G1y-Arg,提出此酶的作用有特異性2。產(chǎn)色基質(zhì)內(nèi)毒素檢測法即是據(jù)此原理而設(shè)計的。



一般地講內(nèi)毒素與試劑的反應(yīng)是非常特異的,因此,LT法的假陽性極少。從革法蘭氏陽性菌分離出的肽聚糖雖亦能凝固鱟試劑,但其活性比內(nèi)毒素低1000~ 400000倍。


近來發(fā)現(xiàn)一種新的合成抗癌劑羧甲基13-β-D-葡聚糖亦能與鱟試劑起反應(yīng)。其反應(yīng)原理是:鱟試劑中含有一種稱為G因子的物質(zhì),此抗癌劑能激活試劑中的G因子,而活化的G因子又依次激活前凝固酶、可凝固蛋白,從而形成凝膠2。至此凝血酶、凝血激酶,Poly I:CPo1yA:U、核糖核酸酶、胰蛋白酶等亦可凝固鱟試劑而引起假陽反應(yīng)。但用氯仿處理此等物質(zhì)(浸取34小時可以除去這些物質(zhì)從而可避免發(fā)生假陽性反應(yīng)。


哺乳類動物血漿中含一種酯酶它對內(nèi)毒素有降解及脫毒的作用,故用LT法檢測血漿中的內(nèi)毒素易受此種物質(zhì)的影響,而造成假陰性結(jié)果。為了避免此等因素的影響,在試驗前血漿需經(jīng)過特殊處理。目前共有下述四種方法處理血漿,即稀釋加熱法、酸化值液、氯仿浸取法及凝膠過濾法。我們及其它的一些工作者認(rèn)為稀釋加熱法簡便易行,效果較好。


血液中,還有一種稱之為抗LPS因子Anti - LPS - factor,ALF的蛋白物質(zhì),分子量約為15KDa為一種血抗凝劑,LPS介導(dǎo)的LT反應(yīng)有直接的抑制作用。ALF可抑制LPSLT反應(yīng)的初始.階段。因此在制備試劑時,應(yīng)將此物質(zhì)清除。氯仿浸取法可有效去ALF。除去ALF及加入Ca++ o.o2M可改善試劑的質(zhì)量,提高敏感性約100倍。

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