N-糖與O-糖蛋白定量分析的流程對(duì)比與優(yōu)化建議檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

糖基化是真核dànbáizhìzuì廣泛的翻譯后修飾之一，深度參與細(xì)胞通訊、受體識(shí)別、免疫調(diào)節(jié)和腫瘤發(fā)生等過(guò)程。N-糖與O-糖作為兩類核心修飾形式，雖同屬糖基化范疇，但在修飾機(jī)制、結(jié)構(gòu)多樣性、分析策略方面存在顯著差異。本文對(duì)兩者在定量分析中的流程進(jìn)行系統(tǒng)比較，并結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)發(fā)展，提出高效、jīngzhǔn的流程優(yōu)化建議。

一、N-糖與O-糖修飾特征概覽

N-糖修飾依賴于共識(shí)序列（Asn-X-Ser/Thr），由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體內(nèi)多步酶促反應(yīng)生成，結(jié)構(gòu)常表現(xiàn)為分支型復(fù)雜糖鏈。O-糖修飾則不依賴特定序列，直接在sīānsuān或sūānsuān殘基上添加糖基，結(jié)構(gòu)類型和位點(diǎn)分布更加多樣，尤其在黏附分子、黏液蛋白等富集。

二、定量分析的核心流程構(gòu)成

糖蛋白定量分析通常包括：

• 樣本預(yù)處理：蛋白提取、還原、烷基化以消除結(jié)構(gòu)干擾

• 酶切策略：使用蛋白酶生成適于質(zhì)譜分析的肽段

• 糖肽富集：通過(guò)HILIC、lectin親和或化學(xué)標(biāo)記法選擇性分離

• 糖鏈處理：N-糖可酶促釋放，O-糖常需堿性化學(xué)法或衍生策略輔助

• 定量標(biāo)記：采用TMT、iTRAQ等標(biāo)記技術(shù)或基于MS信號(hào)強(qiáng)度的標(biāo)簽自由策略

• 質(zhì)譜檢測(cè)：LC-MS/MS實(shí)現(xiàn)糖肽識(shí)別、修飾位點(diǎn)定位與定量分析

• 數(shù)據(jù)處理：利用高分辨譜圖和算法識(shí)別糖肽結(jié)構(gòu)，輸出定量結(jié)果

三、兩類糖蛋白分析流程對(duì)比

四、分析流程優(yōu)化建議

1、多酶組合提升位點(diǎn)覆蓋率

單一酶切策略常受限于修飾位點(diǎn)附近肽段的可識(shí)別性。推薦結(jié)合酶種（如Trypsin與Glu-C、Asp-N）協(xié)同切割，以提高N-糖和O-糖位點(diǎn)的覆蓋度和檢測(cè)靈敏度。

2、結(jié)合多種富集機(jī)制增強(qiáng)特異性

N-糖肽推薦結(jié)合lectin和HILIC串聯(lián)富集策略，提升特異性和回收率。O-糖肽建議采用基于肽段親水性、化學(xué)衍生和選擇性捕獲（如BEMAD）等復(fù)合富集方式，降低非特異背景。

3、定制化修飾位點(diǎn)識(shí)別策略

N-糖位點(diǎn)可利用18O水標(biāo)記實(shí)現(xiàn)定量釋放并輔助定位。O-糖由于缺乏酶法釋放標(biāo)記路徑，更需依賴ETD/EThcD等碎裂方式配合高分辨算法jīngzhǔn定位，推薦采用支持譜圖級(jí)別解析的算法如Byonic、O-Pair等。

4、引入高分辨率質(zhì)譜平臺(tái)

高分辨LC-MS/MS系統(tǒng)能顯著提升低豐度糖肽的檢測(cè)通量和修飾解析能力。建議結(jié)合DIA或PRM策略對(duì)關(guān)鍵修飾位點(diǎn)實(shí)現(xiàn)高重復(fù)性定量，尤其適用于O-糖修飾研究。

5、強(qiáng)化生物信息學(xué)分析工具整合

當(dāng)前O-糖組學(xué)數(shù)據(jù)解析仍面臨挑戰(zhàn)，包括數(shù)據(jù)庫(kù)覆蓋不足、糖肽預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性有待提升等問(wèn)題。建議使用多引擎并行策略，結(jié)合人工干預(yù)和AI輔助識(shí)別，提升位點(diǎn)識(shí)別率和定量準(zhǔn)確性。

百泰派克生物科技的zhuānyè支持

百泰派克生物科技基于高分辨質(zhì)譜平臺(tái)，構(gòu)建了覆蓋N-糖與O-糖蛋白定量的全流程分析體系。我們采用多重富集策略與優(yōu)化酶切流程，配合優(yōu)良的biāojìdìng量技術(shù)和深度譜圖解讀算法，為科研客戶提供高準(zhǔn)確性、高覆蓋率的糖基化修飾定量服務(wù)。無(wú)論是基礎(chǔ)機(jī)制研究，還是疾病標(biāo)志物開發(fā)，我們均可提供個(gè)性化解決方案與數(shù)據(jù)支持。如需進(jìn)一步了解高通量糖蛋白組學(xué)解決方案，歡迎聯(lián)系我們！

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

N-糖與O-糖蛋白定量分析的流程對(duì)比與優(yōu)化建議檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹