從富集到鑒定：糖蛋白質組學質譜方法全解讀檢測技術服務詳情介紹

糖基化是zuì廣泛存在的dànbáizhì翻譯后修飾之一，在細胞識別、信號轉導、免疫調節(jié)等多種生命過程中發(fā)揮關鍵作用。研究糖dànbáizhì組不僅有助于深入理解生物系統(tǒng)的精細調控機制，還在疾病機制解析和生物標志物發(fā)現(xiàn)中展現(xiàn)出巨大潛力。質譜技術的發(fā)展為糖蛋白的高通量鑒定和jīngquè定量提供了核心支撐。本文將全面梳理糖dànbáizhì組學研究中從樣本處理、糖肽富集、質譜檢測到數(shù)據(jù)分析的關鍵環(huán)節(jié)，幫助科研人員系統(tǒng)掌握該領域的實驗與分析策略。

一、糖dànbáizhì組學研究的核心挑戰(zhàn)

糖基化修飾具有高度的位點選擇性和糖鏈結構多樣性，使得糖蛋白的系統(tǒng)性分析遠比總dànbáizhì組更具復雜性。研究人員需面對以下關鍵難點：

• 糖蛋白在整體dànbáizhì組中豐度較低，信號易被掩蓋

• 糖鏈結構異質性強，增加了質譜解析難度

• 糖肽碎裂模式復雜，常規(guī)算法難以準確注釋

解決這些問題，需要在樣本制備、富集策略和質譜方法上進行高度優(yōu)化，并輔以專門的數(shù)據(jù)處理流程。

二、樣本預處理與糖肽富集策略

在糖dànbáizhì組學分析中，糖肽的有效富集是確保下游質譜靈敏度和特異性的前提。

1、HILIC親水作用色譜

基于糖鏈較強的親水性，HILIC色譜可高效區(qū)分糖肽與非糖肽組分，適用于大規(guī)模篩查糖蛋白修飾位點，具有良好的重現(xiàn)性和通量。

2、凝集素親和捕獲

使用多種凝集素針對特定糖結構進行識別與富集，能在一定程度上提高對不同糖型蛋白的覆蓋，但需結合目標研究設計凝集素組合，避免偏向性。

3、氧化-肟化富集法

通過氧化糖鏈中的順式二醇基團生成醛基，并與肟基或水解肼進行選擇性化學結合，捕獲糖肽，適合結構研究和O-糖肽富集。

※ 各類富集策略應根據(jù)樣本特性與研究目標靈活組合，以實現(xiàn)更全面的糖蛋白覆蓋。

三、酶切與糖鏈處理策略

在蛋白酶切階段，常用yídànbáiméi或Gluc-C酶生成適合質譜分析的肽段。針對N-糖蛋白分析，酶切后可選擇進行PNGase F處理，去除糖鏈并在N位天冬酰胺上形成+1 Da的質量位移，有助于定位糖基化位點。若研究關注糖鏈結構，則應保留糖鏈信息，通過優(yōu)化碎裂模式獲取糖鏈與肽段的組合信息。

四、質譜平臺與碎裂模式優(yōu)化

高分辨質譜平臺結合多種碎裂方式已成為糖dànbáizhì組研究的標準配置。三種常見碎裂模式各有優(yōu)勢：

1、HCD（高能碰撞裂解）

適于產生典型糖鏈氧離子（如HexNAc+、Hex+），有助于識別糖型和結構特征，適合定量研究。

2、ETD（電子轉移裂解）

在保留糖鏈完整性的同時裂解肽段骨架，適合定位糖基化位點，尤其在保留修飾信息方面優(yōu)勢顯著。

3、EThcD（聯(lián)合裂解）

結合HCD與ETD信號，可在一次掃描中同時獲得糖鏈與肽段信息，提升糖肽鑒定的深度與準確性。

※ 碎裂模式的選擇需結合實驗目的和儀器配置進行調整，尤其在大規(guī)模分析或高通量篩查中尤為關鍵。

五、數(shù)據(jù)處理與糖肽結構解析

糖dànbáizhì組數(shù)據(jù)的分析是當前技術發(fā)展的重點之一。標準流程包括：

• 原始譜圖質量控制與峰提取

• 與數(shù)據(jù)庫匹配獲取糖肽候選序列

• 基于碎片離子與糖鏈特征進行打分篩選

• 確認糖基化位點與糖鏈結構

*的搜索引擎已逐步支持異構糖鏈識別、多糖型匹配以及定量分析，提升結果的可解釋性與重現(xiàn)性。同時，人工驗證與交叉比對仍在某些關鍵研究中bùkěhuòquē，特別是在新型糖鏈結構或未知修飾位點的研究中。

六、糖dànbáizhì組定量策略

定量分析是理解糖蛋白功能變化的關鍵。常見定量方法包括：

• TMT/iTRAQ多肽標記：可實現(xiàn)多樣本并行定量，適合差異表達篩查

• Label-free定量：不依賴標簽，靈活性高，適合復雜樣本組分析

• 糖鏈特異性標記策略：結合化學標記提高特定糖肽的定量靈敏度

高質量定量結果需結合生物信息學方法進行統(tǒng)計與通路富集分析，識別關鍵調控節(jié)點。

糖dànbáizhì組學正推動我們對細胞調控機制的深入理解，其在疾病診斷、靶點發(fā)現(xiàn)及生物藥開發(fā)中的應用潛力不斷擴展。基于質譜的研究平臺正在不斷演進，推動糖基化研究向更高分辨率和更廣覆蓋度發(fā)展。針對糖dànbáizhì組學的復雜需求，百泰派克生物科技提供覆蓋全流程的一體化服務方案。我們將持續(xù)優(yōu)化富集、檢測與解析流程，為科研人員提供可信賴、高效能的糖dànbáizhì組學整體解決方案。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統(tǒng)進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數(shù)據(jù)轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術*，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優(yōu)質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質的生物質譜分析服務!

從富集到鑒定：糖蛋白質組學質譜方法全解讀檢測技術服務詳情介紹