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化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>生化試劑>其它生化試劑>T0214 2xTaq ultra PCR Mix 藍(lán)色(含染料)

T0214 2xTaq ultra PCR Mix 藍(lán)色(含染料)

參考價(jià) 50.00-190.00
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
產(chǎn)品標(biāo)簽

藍(lán)色PCR MixPCR Mix (含染料)

規(guī)格
1ml50.00元9999 件可售
5*1ml190.00元9999 件可售

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北京蘭博利德商貿(mào)有限公司,成立于2007年。 專業(yè)從事生命科學(xué)方面的服務(wù),為客戶提供試劑、耗材、儀器等產(chǎn)品,主要涵蓋生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、微生物學(xué)、植物學(xué)、免疫學(xué)、免疫診斷、分子診斷等領(lǐng)域。


我公司有一支具有高度專業(yè)化的團(tuán)隊(duì),主要成員都來自于生物消耗品行業(yè)的的企業(yè),有多年的從業(yè)經(jīng)驗(yàn),可以為客戶提供標(biāo)準(zhǔn)化、專業(yè)化的服務(wù)。同時(shí),生物行業(yè)的專家為我公司的發(fā)展提供戰(zhàn)略發(fā)展方面的資訊。


蘭博利德的企業(yè)使命 — 助力生物科研,促進(jìn)生物科技發(fā)展!

 

蘭博利德的核心價(jià)值— 誠信、共贏、團(tuán)結(jié)、專注!

 

 

 

 

生命科學(xué)產(chǎn)品、生化試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材等

供貨周期 一周 貨號 T0214

2xTaq ultra PCR Mix 藍(lán)色(含染料)

產(chǎn)品貨號:T0214

存儲條件:-20℃

 

2xTaq ultra PCR Mix 藍(lán)色(含染料)

產(chǎn)品說明

2x Taq Ultra PCR mix 的濃度為 2x,使用方便快捷,能減少 PCR操作過程中的污染,使用時(shí)只需取適量2x Taq Ultra PCR mix(藍(lán)色染料),加入模板和引物,并加入ddH2O 補(bǔ)足體積,使反應(yīng)體系濃度為 1x,即可進(jìn)行 PCR 反應(yīng)。PCR 產(chǎn)物 3'端帶突出A堿基,純化后可直接用于 T/A 克隆。

本產(chǎn)品中含有 Taq DNA 聚合酶和一種含有 3'→5'外切活性的蛋白,能夠高效擴(kuò)增≤7 kb 的 DNA 片段,擴(kuò)增產(chǎn)量高,配合優(yōu)化后的反應(yīng)緩沖液,可實(shí)現(xiàn)對不同 GC 含量(30%~70%)的高效擴(kuò)增。此外相較于普通Taq PCR Mix 延伸速度提高了 2~4 倍,可有效縮短反應(yīng)時(shí)間。

本PCR Mix中包含兩種染料PCR產(chǎn)物無需添加 Loading Buffer可直接點(diǎn)樣電泳,且電泳過程中會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色和紅色兩個(gè)指示條帶。該染料不影響 PCR 擴(kuò)增效率,但對于需要對PCR 產(chǎn)物進(jìn)行吸光度、熒光等光學(xué)分析的實(shí)驗(yàn),建議在分析前對 PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化。

 

質(zhì)量控制

核酸內(nèi)切酶活性檢測

將25 μl 2x Taq ultra PCR Mix與 200 ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 配制成 50 μl 反應(yīng)體系,在37°C下,共同溫育4h后,使用瓊脂糖凝膠電泳檢測,少于 10% 的質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)變成缺刻或線性狀態(tài)。

非特異性核酸酶活性檢測

將25 μl 2x Taq Ultra PCR Mix與 15 ng 雙鏈 DNA 片段配制成 50 μl反應(yīng)體系,在 37℃下溫育 16 h,使用瓊脂糖凝膠電泳檢測雙鏈 DNA 底物無變化。

 

使用方法

1.常規(guī) PCR 反應(yīng)體系 ( 冰上操作 )

試劑

使用量

終濃度

2x Taq Ultra PCR mix

25 ul

1x

正向引物(10uM)b

1~2 ul

0.2~0.4uM

反向引物(10uM)b

1~2 ul

0.2~0.4uM

模板DNAc

X ul


ddH2O

Up to 50 ul


a. 需融解完quan后使用,防止離子濃度不均勻;

b. 引物推薦終濃度為0.2~0.4 μM,效果不佳時(shí)可以在 0.1~1 μM 濃度范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整;

c. 不同模板最佳反應(yīng)濃度有所不同,以 50 μl 體系為例:模板為基因組 DNA 時(shí)一般推薦的使用量為 10~200 ng;當(dāng)模板為質(zhì)?;虿《?DNA 時(shí),一般推薦的使用量為 10 pg~5 ng。模板量過多時(shí)容易造成非特異性擴(kuò)增。

2. 三步法 PCR 反應(yīng)程序

步驟

溫度

時(shí)間

循環(huán)

預(yù)變性d

95℃

3~5 min


變性

95℃

30 s

30-35cycles

退火e

55~65℃

30 s

延伸

72℃

15~30 s/kb

終延伸

72℃

5 min


3. 二步法 PCR 反應(yīng)程序

步驟

溫度

時(shí)間

循環(huán)

預(yù)變性d

95℃

3~5 min


變性

95℃

30 s

30-35cycles

退火和延伸e

60~65℃

30 s/kb

終延伸

72℃

5 min


d. 菌落 PCR 時(shí)預(yù)變性 10 min,可充分破壁細(xì)胞,大腸桿菌或酵母菌均可高效擴(kuò)增。

e. 退火溫度請根據(jù)引物 Tm 值設(shè)置。如果需要,推薦通過建立溫度梯度尋找引物與模板結(jié)合的最適溫度。此外,退火溫度直接決定擴(kuò)增特異性,如發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增特異性差,可適當(dāng)提高退火溫度。

f. 目的片段長度< 3 kb,延伸時(shí)間可縮短至 15 s/kb;目的片段長度>3 kb,延伸時(shí)間建議 30 s/kb。若要達(dá)到最佳擴(kuò)增效果或較高產(chǎn)量,推薦統(tǒng)一使用 30s/kb 速度延伸。 

 

注意事項(xiàng)

一、引物設(shè)計(jì)

1. 引物 3' 端最后一個(gè)堿基最好為 G 或者 C。

2. 引物 3' 端最后8個(gè)堿基應(yīng)避免出現(xiàn)連續(xù)錯(cuò)配,同時(shí)也避免出現(xiàn)發(fā)夾結(jié)構(gòu)。

3. 正向引物和反向引物的 Tm 值相差不超過 1℃為佳,Tm值調(diào)整至 55~65°C為佳(引物Tm值推薦使用 Primer Premier5進(jìn)行計(jì)算)。

4. 引物額外附加序列,即與模板非配對序列,不應(yīng)參與引物 Tm 值計(jì)算;引物的 GC 含量控制在 40%~60% 之間。

5. 引物 A、G、C、T整體分布要盡量均勻,避免使用 GC 或者 AT 含量高的區(qū)域。

6. 引物內(nèi)部或者兩條引物之間避免有5個(gè)堿基以上的互補(bǔ)序列,兩條引物的 3'端避免有3個(gè)堿基以上的互補(bǔ)序列。

7. 引物設(shè)計(jì)完畢請使用 NCBI BLAST 功能檢索引物特異性,以避免產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。

 

二. 產(chǎn)物電泳與染色

建議使用泡染法進(jìn)行電泳后染色,膠染法會(huì)導(dǎo)致紅色指示條帶發(fā)生彌散,不利于條帶指示,對藍(lán)色指示條帶無影響。藍(lán)色條帶在 1% TAE 緩沖液中遷移速率約等于 1500 bp,紅色條帶在 1% TAE 緩沖液中遷移速率約等于 100 bp。

 





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