胞质注射实验
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- 公司名称 上海达为科生物科技有限公司
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- 厂商性质 生产厂家
- 更新时间 2025/7/10 14:05:36
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一、技术定义与核心原理
胞质注射是显微注射技术的一种，通过显微操作系统将外源基因直接注入细胞质（而非细胞核），实现基因导入。其核心机制包括：
非整合性表达：外源DNA以游离体形式存在，通过细胞自身转录机制表达，不整合至宿主基因组（区别于原核注射的随机整合）。
适用性广：可操作单细胞（如原代细胞、干细胞）及多细胞胚胎（如2细胞期胚胎）。
瞬时表达为主：外源基因随细胞分裂逐渐丢失，表达周期较短（通常<72小时）。
生物学基础：
依赖细胞质内的转录因子与RNA聚合酶完成外源基因表达，无需核定位信号（NLS）介导。
二、标准化操作流程
（一）设备与材料准备
| 组件 | 参数要求 | 功能说明 | 引用来源 |
|---|---|---|---|
| 显微操作系统 | 微操纵器精度0.1μm，注射针内径<0.5μm | 精准控制注射位置与深度 | |
| 外源DNA溶液 | 浓度1-5 ng/μL，溶于低离子强度缓冲液（如TE） | 减少细胞毒性，提升表达效率 | |
| 靶细胞类型 | 原代角质形成细胞、HEK-293T、早期胚胎等 | 需具备较强DNA摄取与表达能力 |
（二）操作步骤
关键参数：
注射压力：5-10 hPa（过高导致细胞破裂）。
注射时长：单细胞≤30秒，避免细胞脱水。
存活率控制：熟练操作下细胞存活率>80%，胚胎存活率>70%。
（三）表达验证方法
荧光标记法：
注射含GFP/RFP报告基因的载体，24小时后荧光显微镜观察。
蛋白检测法：
Western Blot或免疫组化检测目标蛋白表达。
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