ELISpot Pro: Human IL-4 (ALP)人IL-4检测

MABTECH ELISPOT 实验原理

ELISPOT 实验使用 PVDF 膜为底的 96 孔板（cat：MSIPS 4510，Millipore），包被上特异性单克隆抗体（需要无毒，不含内毒素，亲和力高的抗体），以捕获细胞分泌的细胞因子。

然后在培养板的孔内加入待检测的细胞和抗原刺激物进行培养。在刺激物的刺激下，T 细胞就会在对应的时间段分泌对应的细胞因子。此时细胞因子就被包被在膜上的抗体所捕获。

洗去细胞后，被捕获的细胞因子可以与biotin标记的第二抗体结合，然后用酶标亲和素与biotin结合，进行化学酶联显色，就可以在膜的局部形成一个个圆形的斑点（当然，也可以使用荧光素标记的第二抗体，这样就省去了后续的化学显色方法，并且一次可以检测多种细胞因子），每一个斑点就对应了当初一个分泌细胞因子的细胞。

统计膜上的斑点的数目，再除以当初加入孔内的细胞总数，就可以计算出阳性细胞的百分比。

MABTECH该技术有以下三大优点：

一：灵敏度高。一百万个细胞中只要有一个细胞分泌细胞因子就可被检测出来，相对于传统的 ELISA 方法提升了 ２～３ 个数量级。

二：单细胞水平，活细胞功能检测。ELISPOT 是用抗原直接刺激活细胞，检测的是活细胞的功能。

三：操作简便经济，可进行高通量筛选。ELISPOT 没有复杂的细胞体外扩增过程，不使用同位素，按照标准化的实验操作，一个实验者可以同时处理数百个样品，效率远远高于其它检测方法。

ELISpot Pro: Human IL-4 (ALP)人IL-4检测

MABTECH :3420-2APW-2包括：

Pre-coated plates, mAb IL4-I(2 white plates) Detection mAb: IL4-II, ALP(150 μl)

BCIP/NBT-plus substrate(25ml)

Positive control: Anti-CD3mAb (CD3-2) (100 μl)

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