人登革热 NS1 抗原ELISA试剂盒

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6个月

实验原理

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中人登革热 NS1 抗原。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中登革热 NS1 抗原相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻-底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中人登革热 NS1 抗原的存在与否。

试剂盒组成

130 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7终止液6ml×1 瓶

2酶标试剂6ml×1/瓶8阳性对照0.5ml×1 瓶

3酶标包被板12 孔×8 条9阴性对照0.5ml×1 瓶

4样品稀释液6ml×1 瓶10说明书1 份

5显色剂 A 液6ml×1 瓶11封板膜2 张

6显色剂 B 液6ml×1 瓶12密封袋1 个

操作步骤

1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1

孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照（标准品）50µl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部， 尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液加蒸馏水至 600ml 后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先加入显色剂 A 50µl，再加入显色剂 B 50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟

10.终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.15 临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者为登革热 NS1 抗原阴性阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为登革热 NS1 抗原阳性

注意事项

1.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2.人登革热 NS1 抗原ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5.底物请避光保存。

6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm

7.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。