细胞名称：JIMT-1人乳腺癌细胞

种属来源：人

性别年龄：女性，62岁

组织来源：乳腺

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

细胞规格：1 X 10⁶cells/T25或1 mL冻存管

培养条件：DMEM + 10% fetal bovine serum (FBS)+1%P/S

         37 ℃, 5% CO2

冻存条件：90% FBS + 10% DMSO

传代方法：1:2-1:6传代, 2-3天传1代

细胞培养操作

干冰运输：收到细胞后需立即转入液氮保存、或者-80°C冰箱短期冻存、或者直接复苏

常温运输：收到细胞后，请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出，并按照下方操作步骤进行培养传代

细胞传代：细胞密度达80% - 90%，即可进行传代培养

培养瓶中细胞操作步骤

对于贴壁培养的细胞，寄送前，我们会将培养基充满整个培养瓶，以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。

1. 收到细胞后，请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。因为运输过程中存在颠簸，且有些细胞对温度变化也很敏感，可能存在一些细胞脱落漂浮的情况，这些细胞仍是活细胞，请勿丢弃，可离心富集后传代使用。

2. 对于贴壁细胞，在生物安全柜环境中，用真空泵去除培养瓶中多余的培养基，至剩余5-8mL 左右，随后根据培养基选择合适的CO2含量的37℃恒温培养箱中培养，拧松瓶盖。如果细胞已经长满培养瓶，请立即传代。

3. 对于悬浮的细胞，在生物安全柜环境中，转移培养瓶中的细胞至离心管，150 g 离心 5 分钟，去除上清后，用5 mL培养基吹散细胞，转移至新的培养瓶中，随后置于合适的CO2含量的37℃恒温培养箱中培养。

冻存管细胞操作步骤

注意： 为保证细胞的高活率，请收到产品后，立即解冻培养。

1. 将冻存管置于37℃水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约1分钟。

2. 一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用酒精喷拭冻存管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。

3. 将冻存管中的液体转移到含有5mLwan全培养基的离心管中，150 g 离心 5 分钟，用真空泵去除上清。

4. 用wan全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用。

5. 将细胞置于含有合适CO2的37℃恒温培养箱中培养。

贴壁细胞传代培养

1. 吸取并弃掉培养瓶中培养基，加入PBS润洗一次。

2. 加入1 mL 0.25 (w/v) Trypsin-EDTA 溶液，并置于37℃培养箱中孵育，直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3-5分钟。

3. 加入2mL全培养基中和胰蛋白酶，并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落，并使细胞分散。

4. 将细胞悬液收集到15mL离心管里，150 g 离心 5 分钟，用真空泵去除上清。取适量的培养基将细胞重悬，转移到新的培养瓶中培养。

悬浮细胞传代可参考以下方法：

一、直接传代法

1. 待悬浮细胞长满至 80%～90%（细胞悬液变黄），即可传代；

2. 用吸管吸弃细胞悬液 1 / 2~1 / 3；

3. 加入适量的新鲜培养基，继续培养。

   二、离心传代法（在发现有细胞碎片的情况下）

4. 将细胞悬液转移到离心管内；

5. 150 g 离心 5 min，弃去上层清液；

6. 使用新鲜的培养基重悬细胞；

7. 吸管吸取适量细胞悬液，装入新的培养瓶，再加入适量的新鲜培养基，继续培养。

细胞冻存操作

1. 1000rpm离心5分钟去掉上清。加1 mL血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1 x 10⁶/mL，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识；

2. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80°C冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。

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