兔主动脉平滑肌细胞（原代）
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- 公司名称 上海富雨生物科技有限公司
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- 厂商性质 生产厂家
- 更新时间 2025/2/11 22:13:08
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一、兔主动脉平滑肌细胞简介：
主动脉平滑肌细胞是构成主动脉中膜的主要成分，细胞密度低时常交织成网状，细胞密度高时则排列为旋涡状或栅栏状。血管疾病发生和发展的一个主要因素是由于血管平滑肌细胞转变成为了具有增殖能力的表型。近期的研究表明平滑肌细胞能表达钙离子通道，ICAM-1和VCAM-1。其中ICAM-1和VCAM-1的表达可能是造成血管壁炎症反应，并进一步造成血管疾病的原因 。因此，对血管平滑肌细胞的体外培养和研究可用来发现和确定新的血管疾病的靶向治疗方法。本公司生产的兔主动脉平滑肌细胞采用酶解法制备而来，细胞总量约为5×105/T25方瓶，α-SMA、Desmin免疫荧光染色呈阳性，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
二、 使用方法
1 、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 细胞培养箱中静置 2-3 小时， 以稳定细胞状态，然后打开瓶子回收瓶子中培养液作为后续培养此细胞的培养液（备注： 先使用瓶子中培养液培养及尽快冻存保种细胞， 保存种子后再尝试自己完全培养液培养观察是否适合此细胞生长，以免使用自己培养液不适合细胞生长造成细胞状态不好或死亡） ，最后按照后面细胞传代步骤进行细胞传代培养。
2 、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液， 用 PBS 清洗细胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本脱落后加入培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm/min，离心 5min；
3）弃上清，沉淀细胞用 10ml 培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 细胞培养箱中培养；
4）待细胞贴壁后， 观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3 、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本脱落后加入培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm/min，离心 5min；
3）用适当量的冻存液（培养液： FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1h，然后将其移入-80℃过夜， 24h 后转入液氮中进行长期储存（或者按照梯度程序降温模式直接放置-80 度冻存后并转移液氮中长期储存）。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具） ，快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；
3）第二天，换用新鲜培养基继续培养。
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