根據(jù)《中國藥典》2020版三部生物制品生產(chǎn)檢定用動物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制，用于生產(chǎn)抗體類藥物、蛋白類藥物、細(xì)胞治療產(chǎn)品等生物制品的細(xì)胞系/株，需通過全面的細(xì)胞檢定，并經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)。義翹神州細(xì)胞庫檢測實(shí)驗(yàn)室為生物安全二級實(shí)驗(yàn)室，已在北京市備案，且通過CNAS認(rèn)證。該實(shí)驗(yàn)室按照GMP和GLP質(zhì)量體系運(yùn)行，B+A環(huán)境，滿足無菌檢測、分枝桿菌檢測環(huán)境要求。

義翹神州擁有經(jīng)驗(yàn)豐富的檢測團(tuán)隊(duì)，可全程提供技術(shù)指導(dǎo)，并在項(xiàng)目開展之前提供相關(guān)咨詢。依據(jù)藥典方法及ICH、FDA及其它監(jiān)管法規(guī)，義翹神州可根據(jù)客戶的不同申報(bào)需求，提供細(xì)胞庫檢定方案，以更好地幫助客戶完成中外申報(bào)，滿足出海需求。出具的檢測報(bào)告獲得監(jiān)管部門認(rèn)可，已助力多家公司完成IND和BLA申報(bào)。

細(xì)胞庫的建立

細(xì)胞庫的建立可為生物制品的生產(chǎn)提供檢定合格、質(zhì)量相同、能持續(xù)穩(wěn)定傳代的細(xì)胞。

各級細(xì)胞庫的概念

• PCB：由一個(gè)原始細(xì)胞群體發(fā)展成為傳代穩(wěn)定的細(xì)胞群體，或經(jīng)過克隆培養(yǎng)形成的均一細(xì)胞群體，通過檢定證明適用于生物制品生產(chǎn)或檢定。在特定條件下，將一定數(shù)量、成分均一的細(xì)胞懸液，定量均勻分裝于細(xì)胞凍存管，于液氮凍存，即為細(xì)胞種子，供建立主細(xì)胞庫用。

• WCB：工作細(xì)胞庫的細(xì)胞由MCB傳代擴(kuò)增制成。生產(chǎn)企業(yè)的工作細(xì)胞庫必須限定為一個(gè)細(xì)胞代次。凍存時(shí)細(xì)胞的傳代水平須確保細(xì)胞復(fù)蘇后傳代增殖的細(xì)胞數(shù)量能滿足生產(chǎn)一批或一個(gè)亞批制品。復(fù)蘇后的傳代的水平應(yīng)不超過批準(zhǔn)的該細(xì)胞用于生產(chǎn)的限定。所制備的WCB必須經(jīng)檢定合格后，方可用于生產(chǎn)。

• MCB：取細(xì)胞種子經(jīng)細(xì)胞傳代、增殖后均勻混合成一批，定量均勻分裝于細(xì)胞凍存管，保存于液氮。經(jīng)全面檢定合格后，即可作為主細(xì)胞庫，用于工作細(xì)胞庫的制備。生產(chǎn)企業(yè)的主細(xì)胞庫最多不得超過兩個(gè)細(xì)胞代次。

• EOPC&UPB：生產(chǎn)終末細(xì)胞是指在或超過生產(chǎn)末期時(shí)收獲的細(xì)胞，盡可能取按生產(chǎn)規(guī)模制備的生產(chǎn)末期細(xì)胞。EOPC應(yīng)進(jìn)行一次全面檢定，當(dāng)生產(chǎn)工藝發(fā)生改變時(shí)，應(yīng)重新對EOPC進(jìn)行檢測。收獲液UPB包含生產(chǎn)用細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)上清液。

細(xì)胞庫檢定的必要性

生物制品的安全性：造成生物制品的污染，直接影響產(chǎn)品的安全性； 污染后給企業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

國內(nèi)外法規(guī)要求：中國、美國、歐洲等藥典明確規(guī)定必須對細(xì)胞庫進(jìn)行充分檢定后才可用于生物制品的生產(chǎn)； CDE審查必查項(xiàng)目。

細(xì)胞庫檢定階段

原則上各級細(xì)胞庫建好庫后要及時(shí)進(jìn)行檢定，確保細(xì)胞庫沒有污染后，才能用于下級細(xì)胞庫的建立或產(chǎn)品的生產(chǎn)。 細(xì)胞庫建立后應(yīng)至少對MCB細(xì)胞及生產(chǎn)終末細(xì)胞（EOPC）進(jìn)行一次全面檢定。當(dāng)生產(chǎn)工藝發(fā)生改變時(shí)，應(yīng)重新對EOPC進(jìn)行檢定。每次從MCB建立一個(gè)新的WCB，均應(yīng)按規(guī)定項(xiàng)目進(jìn)行檢定。 IND或BLA階段對細(xì)胞庫的檢定要求是相同的，但需滿足現(xiàn)行藥典法規(guī)的要求。

雙C認(rèn)證細(xì)胞庫檢測服務(wù)  

○ 經(jīng)驗(yàn)豐富，方法成熟                 ○ 檢測快，通量高，周期短                ○ 支持中外雙報(bào)，滿足出海需求

雙C認(rèn)證細(xì)胞庫檢測服務(wù)技術(shù)平臺

蘇州細(xì)胞庫檢測中心

蘇州細(xì)胞庫檢測中心是一個(gè)專門提供細(xì)胞庫檢定服務(wù)的檢測中心，占地面積廣，通量大，可以解決更多客戶需求。同時(shí)實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格遵循GLP和GMP規(guī)范進(jìn)行管理。
• 體系認(rèn)證：CMA認(rèn)證、CNAS (申請中)
• 管理：GMP、GLP、CNAS
• 實(shí)驗(yàn)室：生物二級+負(fù)壓條件

北京細(xì)胞庫檢測中心

擁有專業(yè)的細(xì)胞庫檢測技術(shù)人員，實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)豐富，可根據(jù)不同生物制品類別和國內(nèi)外（如NMPA、FDA、ICH、EMA等）不同的申報(bào)要求，制定規(guī)范科學(xué)和經(jīng)驗(yàn)證的細(xì)胞庫檢定方案。
• 體系認(rèn)證：CNAS認(rèn)證
• 管理：GMP、GLP、CNAS
• 實(shí)驗(yàn)室：生物二級+負(fù)壓條件

實(shí)驗(yàn)室和儀器設(shè)備

實(shí)驗(yàn)室按照GLP和GMP質(zhì)量體系運(yùn)行，B+A環(huán)境，符合無菌檢測、分枝桿菌檢測環(huán)境要求。并通過生物安全二級實(shí)驗(yàn)室備案，保證生物安全。配套共聚焦顯微鏡、透射電鏡、熒光定量PCR儀等儀器設(shè)備。

細(xì)胞庫檢測服務(wù)范圍

義翹神州可提供主細(xì)胞庫（MCB）、工作細(xì)胞庫（WCB）、收獲液 (UPB)、生產(chǎn)終末細(xì)胞（EOPC）的細(xì)胞庫檢定服務(wù)，已成功檢測多個(gè)CHO、293、間充質(zhì)干細(xì)胞等細(xì)胞庫項(xiàng)目。細(xì)胞庫檢測方法成熟，符合藥典等法規(guī)的要求，且經(jīng)過嚴(yán)格的方法學(xué)驗(yàn)證。

細(xì)胞庫檢測服務(wù)內(nèi)容

義翹神州遵循NMPA、FDA、EMA、ICH等多個(gè)國內(nèi)外法規(guī)和指導(dǎo)原則，建立了全面的細(xì)胞庫檢定方法，主要包括以下幾個(gè)方面：細(xì)胞鑒別、無菌檢查、支原體檢查、內(nèi)外源病毒污染檢查、成瘤性檢查等，義翹神州提供的檢測項(xiàng)目和方法描述見下表：

備注："+" 為必檢項(xiàng)目，"-" 為非強(qiáng)制檢定項(xiàng)目。(+) 表示需要根據(jù)細(xì)胞特性、傳代歷史、培養(yǎng)過程等情況要求的檢定項(xiàng)目。

細(xì)胞庫檢定方法

• 細(xì)菌、真菌檢查
  無菌檢查
  按照2020版《中國藥典》三部通則1101無菌檢查法的要求進(jìn)行，義翹神州可提供薄膜過濾法和直接接種法。無菌檢查在B+A環(huán)境中進(jìn)行，并且在檢測過程中對環(huán)境進(jìn)行持續(xù)監(jiān)測。下圖是采用薄膜過濾法的案例。

• 支原體檢查——培養(yǎng)法
  按照2020版《中國藥典》中生物制品生產(chǎn)檢定用動物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制及通則3301支原體檢查法的要求進(jìn)行，義翹神州提供符合法規(guī)要求的支原體檢查（培養(yǎng)法）。培養(yǎng)法檢測的靈敏度高于中國藥典要求，肺炎支原體達(dá)到10-9，口腔支原體達(dá)到10-5。

• 支原體檢查——DNA染色法
  按照2020版《中國藥典》中生物制品生產(chǎn)檢定用動物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制及通則3301支原體檢查法的要求進(jìn)行，義翹神州提供符合法規(guī)要求的指示細(xì)胞培養(yǎng)法（DNA 染色法）。如果樣品被支原體污染，在熒光顯微鏡下除細(xì)胞外，可見大小不等、不規(guī)則的熒光著色顆粒。

• 內(nèi)外源病毒污染檢查——體外不同指示細(xì)胞接種培養(yǎng)
  按照2020版《中國藥典》中生物制品生產(chǎn)檢定用動物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制的要求進(jìn)行，根據(jù)樣品需求提供周期為14或28天（人或猴巨細(xì)胞病毒，CMV）的檢測。將供試品接種至3種指示細(xì)胞（Vero、MRC-5、同種屬同組織類型來源細(xì)胞），連續(xù)培養(yǎng)14天或28天，觀察細(xì)胞病變，并采用血吸附和血凝集檢測是否存在任何病毒污染。

• 內(nèi)外源病毒污染檢查——牛源病毒檢查
  按照2020版《中國藥典》中生物制品生產(chǎn)檢定用動物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制及通則3604新生牛血清檢測要求的要求進(jìn)行。通過接種指示細(xì)胞培養(yǎng)21天，分別進(jìn)行細(xì)胞病變觀察（CPE）、血吸附檢查（HAd）及熒光抗體檢測（IF）。牛源性病毒檢查按照中國藥典要求，提供完整的陽性對照和陰性對照。

• 內(nèi)外源病毒污染檢查——豬源病毒檢查
  按照2020版《中國藥典》中生物制品生產(chǎn)檢定用動物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制的要求進(jìn)行，通過接種指示細(xì)胞PK-15培養(yǎng)21天后進(jìn)行細(xì)胞病變觀察（CPE）、血吸附檢查（HAd）。

• 內(nèi)外源病毒污染檢查——?jiǎng)游锖碗u胚體內(nèi)接種法
  按照2020版《中國藥典》中生物制品生產(chǎn)檢定用動物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制及通則3302外源病毒因子檢查法的要求進(jìn)行，義翹神州提供乳鼠腦內(nèi)及腹腔接種法、小鼠腦內(nèi)及腹腔接種法、豚鼠腹腔接種法、家兔皮內(nèi)及皮下接種法、雞胚接種法。