鬼笔环肽染色实验

鬼笔环肽（Phalloidin）是一种从毒蘑菇Amanita phalloides中分离出来的多肽物质，它能够与细胞中的肌动蛋白丝（F-actin）结合，从而用于细胞骨架的染色。

鬼笔环肽与F-actin的结合是高度特异性的，不会与肌动蛋白单体（G-actin）结合，因此它是研究细胞骨架的重要工具。通过使用荧光标记的鬼笔环肽，可以在荧光

显微镜下观察细胞中微丝的分布和形态。

鬼笔环肽染色实验步骤

  1.配制鬼笔环肽溶液：通常将0.1mg的鬼笔环肽溶于1ml无水甲醇中（也可以使用DMSO或无水乙醇），配成贮存液，并在-20°C避光条件下保存。

    工作液的浓度通常为5μg/ml，通过将贮存液用PBS稀释20倍来制备。

  2.细胞固定：使用3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定细胞20分钟，然后用PBS清洗细胞2次。

  3.染色：加入5μg/ml的荧光标记鬼笔环肽，室温染色30-60分钟，然后再次用PBS清洗细胞2次。

  4.细胞核染色：可以使用DAPI或Hoechst等染料对细胞核进行染色，染色时间通常为10分钟，之后再次用PBS清洗细胞2次。

  5.封片：吸去多余水分后，加入荧光封片液（中性或偏碱性缓冲液加等量甘油），盖上盖玻片，准备在荧光或共聚焦显微镜下观察。

注意事项

  1.鬼笔环肽的分子量小，可以轻易穿透细胞膜，因此通常不需要对细胞进行冷丙酮和Triton X-100处理。

  2.鬼笔环肽具有毒性，操作时应戴手套并在通风良好的环境中进行。

  3.鬼笔环肽染色可以与抗体染色结合使用，以同时观察细胞骨架和其他细胞结构。

  4.避免使用含有甲醇或丙酮的固定剂，因为这些固定剂会破坏肌动蛋白的结构，影响染色效果。

应用

广泛应用于细胞生物学研究，包括细胞形态学、细胞运动、细胞分裂以及细胞与细胞之间的相互作用等领域。

通过观察F-actin的分布，研究人员可以更好地理解细胞的功能和病理过程。