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Cell Counting Kit8(CCK8)试剂盒

成都迈睿可生物科技有限公司出品

Cell Counting Kit8(CCK8)试剂盒

Cell Counting Kit-8 (CCK-8试剂盒)使用说明

【产品基本信息】

产品名称：Cell Counting Kit-8 (CCK-8试剂盒) 产品货号：MRC-C23009-500T

【包装清单】

【产品描述】

Cell Counting Kit-8，简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8开发的应用于细胞增殖和细胞毒性检测的试剂盒。

WST-8在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的 formazan (参考图1)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

WST-8被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan为水溶性，无需额外增加溶解步骤，使实验结果更加稳定。同时，培养基中的酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。

图1. WST-8检测原理图 (EC=electron coupling reagent，即电子耦合试剂)

【产品使用说明】

1.通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要，进行培养并给予药物刺激。

推荐操作：通常建议培养板边孔不用于实验，仅加入100μL的培养基以减少培养过程中蒸发的影响

2.每孔加入10微升增强型CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200微升，则需加入20微升增强型CCK-8溶液，其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和增强型CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和增强型CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。

推荐操作：检测前，用新鲜的培养基或不含血清的培养将CCK-8按1:10（CCK-8试剂：培养基）稀释，混匀配成CCK-8工作液。然后吸去培养孔中的培养上清，加入稀释好的CCK-8工作液，100μL/孔。此操作可减少重复样本间的误差。

3.在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

4.在450nm测定吸光度?？梢允褂么笥?00nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。

【保存条件】

4oC避光保存一年有效，-20oC避光保存两年有效。

【注意事项】

1.本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。

2.用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。

3.为了避免CCK-8溶液可能带来的对于后续检测的影响，除非该细胞极难获得，否则不推荐把CCK-8溶液孵育过的细胞用于其它实验。

4.如果吸光度值太低，可适当增加细胞数量或延长加入CCK-8溶液后的孵育时间。

5.部分金属对CCK-8的显色有影响，如：氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜均会降低CCK-8试剂的灵敏度。

6.CCK-8孵育结束后如果不能及时检测，可将培养板放入4℃冰箱，或加入10μL 0.1M Hcl或加入10μL 1% SDS溶液终止反应。

7.试剂使用过程中要避免带入细菌污染。

8本产品仅用于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

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Cell Counting Kit8(CCK8)试剂盒