这些永生化的人肝细胞构成了药物毒理学研究的体外模型，并用于研究人肝细胞癌的病因和发病机理。

注意：使用的烧瓶应预先涂上 0.01 mg / mL纤连蛋白，0.03 mg / mL I型牛胶原蛋白和溶于BEBM培养基中的0.01 mg / mL牛血清白蛋白的混合物。 

1. 移除并丢弃培养基。
2. 加入新鲜的0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液（2.0-3.0毫升，用于T75烧瓶）覆盖细胞，冲洗并除去大部分胰蛋白酶溶液，留下薄涂层。
3. 使培养物在室温（或37℃）下静置直至细胞脱离并在倒置显微镜下观察细胞直至细胞层分散（通常在5至15分钟内）。

   注意：为了避免结块，在等待细胞分离时，不要通过敲击或摇动烧瓶来搅动细胞。难以分离的细胞可置于37℃以促进分散。

4. 用0.1％大豆胰蛋白酶抑制剂中和胰蛋白酶并通过轻轻吹打吸出细胞。通过温和离心（150xg至400xg，8-12分钟）除去解离剂，并将细胞重悬于新鲜的*生长培养基中。 
5. 将适当等份的细胞悬浮液加入新培养容器中。
6. 在37°C孵育培养物。 
7. 建议使用0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液（GIBCO目录号25300-054）进行解离。用0.1％大豆胰蛋白酶抑制剂溶液（ATCC 30-2104）中和。

中等更新：每周两到三次。

注意：有关细胞系的酶解和传代培养的更多信息，请参阅动物细胞培养中的第10章， R.Ian Freshney撰写的基本技术手册，第3版，由Alan R.Liss，NY，1994出版。

冷冻培养基：补充有5％（v / v）DMSO的*生长培养基

储存温度：液氮气相

气氛：空气，95％; 二氧化碳（CO 2），5％

温度： 37°C