柱前衍生同时分析18种氨基酸
详询:天津谱祥科技-刘工
样品信息:
18种氨基酸 出峰顺序依次为1--天冬氨酸ASP、2--谷氨酸GLU、3--丝氨酸SER、4--谷氨酰胺Gln、5--组氨酸HIS、6--甘氨酸GLY、7--苏氨酸THR、8--瓜氨酸CIT、9--精氨酸ARG、10--丙氨酸ALA、11--色氨酸TYR、12--半胱氨酸CYSTINE、13--缬氨酸VAL、14--蛋氨酸MET、15--苯丙氨酸PHE、16--异亮氨酸ILE、17-亮氨酸LEU、18--赖氨酸LYS
检测目的:在线柱前衍生分析18种氨基酸
检测原理:
岛津prominence 20A UFLC系统升级后,可以在定量环内实现柱前在线衍生。
衍生时,进样针首先吸取硼酸buffer到定量环(硼酸buffer pH值7.0,在碱性条件下衍生效果更好)----再吸取OPA和3-巯基丙酸的混合液(OPA衍生一级胺,3-巯基丙酸?;ぐ被幔?---再吸取FMOC(FMOC衍生二级胺)----zui后吸取氨基酸标准品溶液---混合充分反应,进样分析。
检测方法:标准品储备液,稀释后衍生进样分析
分析仪器:岛津prominence 20A UFLC系统
液相色谱条件:
色谱柱: | Inertsil ODS-4 3um 4.6*150mm 货号:5020-04045 |
流动相: | A:水(40mM磷酸盐,Ph7.0) B:乙腈/甲醇/水=45:45:10 |
流速: | 1.0ml/min |
柱温: | 40℃ |
检测器: | UV,262nm、338nm |
进样量: | 1ul |
衍生剂配制方法: | |
OPA配制: | 10mgOPA溶于1ml溶液(0.16ml甲醇+0.14ml硼酸缓冲液+0.7ml纯水) |
3-巯基丙酸: | 10ul 3-巯基丙酸用纯水稀释至1ml |
硼酸缓冲液: | 0.1mol/L,用0.4mol/L的氢氧化钠调节pH值至10 |
FMOC: | 10mgFMOC溶于1ml乙腈 |
梯度条件,见表1: |
time(min) | Module | Command | Value |
---|---|---|---|
2.5 | pumps | pump B Conc | 13 |
2.51 | pumps | pump B Conc | 15 |
10 | pumps | pump B Conc | 16 |
15 | pumps | pump B Conc | 35 |
26 | pumps | pump B Conc | 42 |
26.01 | pumps | pump B Conc | 100 |
29.5 | pumps | pump B Conc | 100 |
29.51 | pumps | pump B Conc | 12 |
35 | controller | stop |
图谱如下:
图谱1
重现性:
峰号 | RSD%(RT) | RSD%(Area) |
---|---|---|
1 | 0.16 | 1.84 |
2 | 0.05 | 2.18 |
3 | 0.1 | 0.72 |
4 | 0.09 | 0.70 |
5 | 0.08 | 1.09 |
6 | 0.09 | 1.07 |
7 | 0.09 | 0.73 |
8 | 0.1 | 0.85 |
9 | 0.1 | 1.03 |
10 | 0.06 | 0.66 |
11 | 0.04 | 0.87 |
12 | 0.06 | 0.88 |
13 | 0.06 | 0.65 |
14 | 0.07 | 0.97 |
15 | 0.09 | 0.86 |
16 | 0.05 | 0.67 |
17 | 0.09 | 0.77 |
18 | 0.11 | 0.93 |
图2 保留时间与峰面积重现性图谱
另外 提供氨基酸检测分析方案及全套设备,分析设备。
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