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细胞究竟怎么养？2024/05/13

细胞培养技术的广泛应用让我们对生命的奥秘有了更深一步的理解，同时也为医学研究和临床治疗提供了重要支持。无论是研究者还是医生，对细胞培养技术的掌握都是至关重要的，它们将开启更多关于生命的精彩探索之旅。让我们一起走进细胞的微观世界，探寻其中的无限可能吧！01细胞复苏和传代1.1细胞复苏将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移入15ml离心管中，加入8ml预热的1640wan全培养基，轻轻吹匀，离心，1000rpmX5min，弃上清液。加入8ml1640培养基清洗，弃上清液。加

传代细胞培养2017/05/31

传代细胞培养实验原理：传代细胞的培养使用已成功构建的细胞株，大量培养状态良好的同种细胞，并维持细胞种的延续。传代培养是细胞培养常规操作之一，也是所有细胞生物学实验的基础。传代细胞根据细胞的生长习性可分为贴壁细胞和悬浮细胞。实验流程：1.观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。观察时拧紧盖子。2.加热PBS、versene、培养基，(提前做好)瓶子不要倒着放，不要让液体接触到瓶塞。3.打开超净台(先开风机，后开照明)，用75%乙醇清洁台面，点燃酒精灯。不要把废液缸拿出去倒，如

荧光原位杂交原理及步骤2017/05/23

荧光原位杂交/FISH技术服务荧光原位杂交FISH的原理：荧光原位杂交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）的基本原理是用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以将探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。与传统的放射性标记原位杂交相比，荧光原位杂交具有快速、检测信号强、杂交特性高和可以多重染色等特点，因此在分子

蛋白质印迹的实验原理、方法与步骤2017/05/16

蛋白质印迹的实验原理、方法与步骤实验原理WesternBlot（蛋白质印?；蛎庖哂〖＃┘际酰缘鞍字饰觳舛韵?，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将样品蛋白质分离，再转移到固相载体（PVDF尼龙膜或NC膜）上；固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变；然后以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与其对应的抗体（一抗）发生免疫反应，特异性一抗再与和酶耦联的第二抗体反应，zui后在酶的作用下，导致底物显色或化学发光显影，来检测

流式细胞技术实验方法2017/05/02

流式细胞技术实验方法PI染色操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm,5min，弃上清液。2、加入PBS1ml离心洗涤1次，弃上清。3、加入2ml预冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定过夜。4、离心，弃上清液。5、用1×PBS1ml洗涤1次，离心。6、加入RNaseA(工作浓度20ug/ml)于500ul1×PBS中，37℃孵育30min，离心。7、用1×PBS1ml洗涤1次，离心。8、加入PI(工作浓度50ug/ml)于500ul1×PBS中，室温避

ELISA 原理与类型2017/04/24

1.ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物

免疫组化的标准步骤2017/04/17

免疫组化步骤（ABC法）1。4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中过夜。蜡块制作。切片，贴片。0.01MKPBS清洗5min×3后；2。加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01MKPBS100ml＋30%过氧化氢）30min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01MPBS清洗5min×3；3。加入配好的0.3%TritonX100（30%TritonX100＋0.01MKPBS100ml）30min，以增加细胞的通透性，0.01MKPBS清洗5min×3；

流式细胞术中荧光补偿该如何调节？2017/04/10

在讨论流式细胞术中荧光补偿该如何调节的问题前，我们先了解下流式实验为何需要调补偿？荧光分子在被激发后都会发射特定波长范围的光，但是这些荧光的发射光之间会发生光谱重叠。荧光补偿的调节是纠正荧光素发射光谱重叠的过程，即从一个被检测的荧光信号中减掉溢漏过来的其他光。荧光发射光光谱重叠示例：以FITC和PE为例来看光谱重叠。FITC单染管的荧光会部分漏到PE通道中，而这部分需要从PE通道中减掉溢漏过来的FITC荧光。那么荧光补偿该如何调节呢？?调节电压?检测荧光通道的自发荧光?每个荧光通道做单染管对照检

PCR技术操作步骤2017/04/05

PCR实验步骤典型的PCR由（1）高温变性模板；（2）引物与模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补

诺华CAR- T疗法今日获美国FDA优先审评资格2017/04/01

3月29日，诺华宣布美国FDA已为其CAR-T疗法CTL019（tisagenlecleucel-T）的生物制剂许可申请颁发了优先审评资格。这意味着诺华CAR-T生物制剂许可申请的审批流程有望得到进一步的缩减。CTL019zui初由宾夕法尼亚大学开发。2012年，诺华与宾夕法尼亚大学达成合作协议，共同研究、开发与商业化包括CTL019在内的多项CAR-T疗法，用以癌症治疗。目前，CTL019申请上市的适应症为儿童或年轻人中复发或难治性的急性B细胞型淋巴性白血?。˙-cellacutelympho

细胞株和细胞系的区别2016/06/28

人教版（2002年审定通过的全一册）高中生物教材中细胞株和细胞系的概念内涵与浙科版的概念内涵不同甚至*相反。人教版2004年审定通过的《现代生物技术专题》高中教材就没有出现这二个概念。据资料记载是因为这二个概念一度混用，导致概念不清。人教版高中生物细胞株概念强调结束原代培养并可以进行传代培养的细胞群，并不强调细胞群的纯度；浙科版的细胞株概念强调细胞群的纯度，认为细胞株是克隆的结果。人教版高中生物细胞系概念强调这些细胞已发生部分遗传物质的改变，带有癌变的可以传代培养的细胞群；浙科版的细胞系概念强调

免疫荧光技术操作步骤2015/11/24

一.直接免疫荧光法测抗原基本原理将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少，相对使用标记抗体用量偏大。试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4荧光标记的抗体溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份+pH9.20.2M碳酸盐缓冲液1份配制搪瓷桶三只（内有0.01mol/L，pH7.4的PBS1500ml）有盖搪瓷盒一只（内铺一层浸湿的纱布垫）荧光显微镜玻片架滤纸37℃温箱等。

细胞传代的一般方法2015/10/16

开始细胞传代前，仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全：一般主要有：细胞(单层细胞，镜检适合)、培养液(MEM-0.2%LH培养液或MEM培养液或199等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血清、庆大霉素溶液（1万单位）、7.5％NaHC03溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS洗液。用具：小方瓶(100m1)、克氏瓶、胶塞、吸管(10ml、1m1）、细胞吹打管（20ml）(以上用具需经121℃至少15分钟高压灭菌)C02孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、—20℃冰箱操作步骤：镜检细胞，挑选生长状态良好

影响细胞生长的几点因素2015/09/15

一、温度：一般哺乳类及禽类细胞体外培养的适宜温度是37~38℃.温度过高或过低都会影响到细胞的生长.细胞耐受低温的能力比抗热的能力强,在低温下,细胞的代谢活力及核分裂降低.温度低于0℃时,虽影响细胞代谢,但并无伤害作用.把细胞置于23~25℃时,细胞仍能生存和生长,但速度减缓,不过,鱼类细胞的适宜培养温度为23~25℃.若温度过低,在降到冰点以下时,细胞因胞外水和胞质结冰而受损死亡,但若向培养基中加入甘油或二甲基亚砜（DMSO）等?；ぜ?封入安瓿中后,置于液氮或低温冰箱（-70℃）中,可起?；ぷ?

警惕化学药物筛选中的假阳性药物2015/05/14

新药开发领域炙手可热，大量研究人员蜂拥涌入。但是，当中很多人缺乏应有的引导，科研也做成了一团浆糊。每当生物学家们发现一个与疾病相关的靶点蛋白，他们就会想方设法寻找能够与这个蛋白质分子结合并影响其活性的化合物，这些有苗头的化合物常被称为“活性化合物”。一次典型的药物筛选流程能够找到数千种活性化合物，它们可以作为疾病机理研究的工具，也是寻找新药的基础。但是，在筛选试验中，很多化合物展现出来的“活性”仅仅是一种假阳性结果——它们的“活性”并不是基于化合物分子与蛋白质之间特异性的作用。真正的药物能够作用

免疫细胞去向的一种全新机制2014/06/24

中科院上海生物化学与细胞生物学研究所陈剑峰研究组在的一项研究中，揭示了决定免疫细胞去向的一种全新机制。6月19日，相关研究成果在线发表于《发育细胞》。免疫系统是人体内的一套奇妙的保护系统。它不但负责抵御外界细菌、微生物、病毒等的入侵，还负责清除体内衰老、损伤、死亡以及发生癌变的自身细胞。确保免疫细胞在特定的时空迁移到人体内的特定组织和器官是保证免疫系统发挥正常功能的关键步骤。否则，人体会出现自身免疫疾病甚至癌症等严重疾病。但困扰科学家的是，免疫细胞是如何决定其在人体内的去向的。在陈剑峰研究员的指

国内*宫颈癌疫苗进入三期临床试验2014/05/28

国内*个、第三个宫颈癌疫苗产业化项目将在厦门海沧问世，宫颈癌疫苗现已进入三期临床试验观察阶段。厦门万泰沧海生物技术有限公司II期基地在位于海沧的厦门生物医药港奠基，宫颈癌疫苗产业化项目在此问世，并将于2018年前投产。该基地占地67834.644平方米，是对I期研发、生产基地的扩展延伸。据介绍，II期基地将立足戊肝疫苗、宫颈癌疫苗、医疗器械、抗体药物等创新产品的研发和生产，产品起点高，技术设备*，国内同行业水平。据悉，厦门万泰沧海生物技术有限公司是福建省*一家疫苗生产企业，2005年成立，200